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凈化車間沉降菌測(cè)試操作規(guī)程
發(fā)布日期:2017/2/22 12:03:19
1  目的 
建立一個(gè)凈化車間潔凈區(qū)(室)沉降菌檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,保證潔凈區(qū)微生物檢測(cè)按規(guī)范執(zhí)行。 
2  范圍 
公司所有潔凈區(qū)(室)的沉降菌測(cè)定和環(huán)境的驗(yàn)證。 
3  責(zé)任者 
質(zhì)量技術(shù)部對(duì)本SOP實(shí)施負(fù)責(zé)。 
4  程序 
4.1  本測(cè)試方法采用沉降法,即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿,經(jīng)若干時(shí)間,在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù),并以此來(lái)評(píng)定潔凈區(qū)(室)的潔凈度。 
4.2  所用的儀器和設(shè)備 
4.2.1  高壓蒸汽滅菌器 
使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照“高壓蒸汽滅菌器操作規(guī)程”和說(shuō)明書(shū)操作。 
4.2.2  恒溫培養(yǎng)箱 
必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。 
4.2.3  培養(yǎng)皿 
采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。 
4.2.4  培養(yǎng)基 
4.2.4.1  普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。 
4.2.4.2  培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌 
4.2.4.2.1  將Φ90mm的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或180℃干熱滅菌2h。 
4.2.4.2.2 將培養(yǎng)基加熱溶化,冷至45℃時(shí),在無(wú)菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿,每皿約15ml。 
4.2.4.2.3  等瓊脂凝固后,將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 
48h,若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng),即可供采樣用。制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。 
4.3  測(cè)試步驟 
4.3.1  采樣方法 
將已制備好的培養(yǎng)皿按5.4.1.2的要求放置,打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋,使培養(yǎng)基表面暴露0.5h,再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。 
4.3.2  培養(yǎng) 
4.3.2.1  全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 
4.3.2.2  在36℃±1培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時(shí)間不少于48h。 
4.3.2.3  每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn),檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。 
4.3.3  菌落計(jì)數(shù) 
4.3.3.1  用肉眼直接計(jì)數(shù),標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì),然后用5-10倍放大鏡檢查,有否遺漏。 
4.3.3.2  若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊,可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。 

5 注意事項(xiàng) 
5.1  測(cè)試用具要作滅菌處理,以確保測(cè)試的可靠性、正確性。 
5.2  采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。 
5.3  對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。 
5.4  由于細(xì)菌種類繁多,差別甚大,計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察,不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落,并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。 
5.5  采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量,如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。 

6  測(cè)試規(guī)則 
6.1  測(cè)試狀態(tài) 
6.1.1  沉降菌測(cè)試前,被測(cè)試潔凈區(qū)(室)的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求,靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。 
6.1.2  沉降菌測(cè)試前,被測(cè)試潔凈區(qū)(室)已經(jīng)過(guò)消毒。 
6.1.3  測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種,測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求,并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。 
6.2  測(cè)試人員 
6.2.1  測(cè)試人同必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。 
6.2.2  靜態(tài)測(cè)試時(shí),室內(nèi)測(cè)試人員不得多于二人。 
6.3  測(cè)試時(shí)間 
6.3.1  對(duì)單向流,如100級(jí)凈化房間及層流工作臺(tái),測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開(kāi)始。 
6.3.2  對(duì)非單向流,如10000級(jí)、100000級(jí)以上的凈化房間,測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。 
6.4  沉降菌計(jì)數(shù) 
6.4.1  采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置 
6.4.1.1  最少采樣點(diǎn)數(shù)目 
沉降法的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定。 

6.4.1.2  采樣點(diǎn)的布置 
6.4.1.2.1  工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。 
6.4.1.2.2  可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。 
6.4.1.2.3  采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見(jiàn)附圖。 
6.5  記錄 
測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差及測(cè)試狀態(tài)。 
測(cè)試報(bào)告的編寫見(jiàn)附表。 
6.6  結(jié)果 
6.6.1  用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。 
6.6.2平均菌落數(shù)的計(jì)算,見(jiàn)下式。 
 
式中:M為平均菌落數(shù) 
M1為1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù) 
M2為2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù) 
Mn為n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù) 
n為培養(yǎng)皿總數(shù)。 


6.7  結(jié)果評(píng)定 

用平均菌落數(shù)判斷潔凈區(qū)(室)空氣中的微生物。100,000級(jí)潔凈區(qū)沉降菌(個(gè)/m2)應(yīng)小于等于l0個(gè);10000級(jí)潔凈區(qū)沉降菌(個(gè)/m2)應(yīng)小于等于3個(gè);100級(jí)潔凈區(qū)沉降菌(個(gè)/m2)應(yīng)小于等于1個(gè)。 

6.7.1  潔凈區(qū)(室)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。 

6.7.2  若某潔凈區(qū)(區(qū))內(nèi)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn),則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒,然后重新采樣兩次,測(cè)試結(jié)果均須合格。 
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