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凈化車間沉降菌測試操作規程

發布日期：2017/2/22 12:03:19

1 目的
建立一個凈化車間潔凈區（室）沉降菌檢測的標準操作程序，保證潔凈區微生物檢測按規范執行。
2 范圍
公司所有潔凈區（室）的沉降菌測定和環境的驗證。
3 責任者
質量技術部對本SOP實施負責。
4 程序
4.1 本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈區（室）的潔凈度。
4.2 所用的儀器和設備
4.2.1 高壓蒸汽滅菌器
使用時應嚴格按照“高壓蒸汽滅菌器操作規程”和說明書操作。
4.2.2 恒溫培養箱
必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。
4.2.3 培養皿
采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養皿。
4.2.4 培養基
4.2.4.1 普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。
4.2.4.2 培養基的準備及滅菌
4.2.4.2.1 將Φ90mm的培養皿置于121℃濕熱滅菌20min或180℃干熱滅菌2h。
4.2.4.2.2 將培養基加熱溶化，冷至45℃時，在無菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。
4.2.4.2.3 等瓊脂凝固后，將培養基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養箱中培養
48h，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。制備好的培養基平皿宜在2℃-8℃的環境中存放。
4.3 測試步驟
4.3.1 采樣方法
將已制備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5h，再將培養皿蓋蓋上后倒置。
4.3.2 培養
4.3.2.1 全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。
4.3.2.2 在36℃±1培養箱中培養，時間不少于48h。
4.3.2.3 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。
4.3.3 菌落計數
4.3.3.1 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
4.3.3.2 若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

5 注意事項
5.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
5.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。
5.3 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
5.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
5.5 采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。

6 測試規則
6.1 測試狀態
6.1.1 沉降菌測試前，被測試潔凈區（室）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。
6.1.2 沉降菌測試前，被測試潔凈區（室）已經過消毒。
6.1.3 測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態。
6.2 測試人員
6.2.1 測試人同必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。
6.2.2 靜態測試時，室內測試人員不得多于二人。
6.3 測試時間
6.3.1 對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10min后開始。
6.3.2 對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開始。
6.4 沉降菌計數
6.4.1 采樣點數目及其布置
6.4.1.1 最少采樣點數目
沉降法的最少采樣點數可按表1確定。

6.4.1.2 采樣點的布置
6.4.1.2.1 工作區采樣點的位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。
6.4.1.2.2 可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。
6.4.1.2.3 采樣點位置的詳細規則見附圖。
6.5 記錄
測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態。
測試報告的編寫見附表。
6.6 結果
6.6.1 用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
6.6.2平均菌落數的計算，見下式。

式中：M為平均菌落數
M1為1號培養皿菌落數
M2為2號培養皿菌落數
Mn為n號培養皿菌落數
n為培養皿總數。

6.7 結果評定

用平均菌落數判斷潔凈區（室）空氣中的微生物。100,000級潔凈區沉降菌(個／m2)應小于等于l0個；10000級潔凈區沉降菌(個／m2)應小于等于3個；100級潔凈區沉降菌(個／m2)應小于等于1個。

6.7.1 潔凈區(室)內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。

6.7.2 若某潔凈區（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。

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